About our business

Since its establishment in 2003, Guangzhou Sowe (Guangzhou Xiuwei Trading Co., Ltd.) has become a very professional pathology supplier with the most complete product line in China, relying on its in-depth insight into the pathology industry and continuous innovation.


The company has 8 R&D centers and 3 production bases, bringing together many industry elites and cutting-edge technologies, and is committed to providing customers with excellent products and services.  


The products cover clinical pathology, scientific research, animal and plant research, forensic medicine and other fields, and are exported to many countries and regions in Asia, Europe, the Middle East, South America and so on.


In 2021, Guangzhou Sowe became the first pathology brand to be broadcast on CCTV's "Brand Traceability" program.


Guangzhou Sowe Trading Co., Ltd. was awarded the title of "National High-tech Enterprise" in 2016.

【病理技术分享】影响固定质量的因素

固定是指把病理组织浸泡在适宜的化学试剂内,借助化学试剂的作用,使组织或细胞内蛋白质凝聚、沉淀或变性成为不溶性物质,并保持组织、细胞原有的形态结构。在切片制作过程中,固定是最为重要的步骤,一张优秀的组织学切片建立在及时而适当的固定基础之上。




第一部分

   固定

  • 病理学固定的主要目标是维持清晰的形态特征(Eltoum et al 2001a, 2001b; Grizzle et al 2001)。

  • 固定是将某些化学试剂渗透到需要保存或制作切片的脏器或组织、细胞中,使其所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构、位置及生物学特点。


固定的目的

①保持细胞与存活时的形态和结构相似。防止细胞在自身溶酶体酶的作用下溶解破坏,发生自溶;或因细菌繁殖引起组织腐败。

②保持细胞内特殊成分与存活状态时相仿。固定不但能沉淀或凝固组织内的各种成分和病理代谢产物,如蛋白质、脂肪、糖类、色素,也可使其他碳水化合物、无机成分及微生物等经过固定而保存下来,使其定位在细胞内的原有部位,有利于染色后确切定位。对于不同的物质应选用不同的固定液和固定方法。

③便于区别不同组织成分。组织细胞内的不同物质经固定后产生不同的折光率,对染料产生不同的亲和力,经染色后容易区别。

④有利于切片。固定液兼有硬化作用,能使柔软组织(如脑)的质地变硬也能使胶质物体固化,使细胞正常的半液体状(溶胶)变为不能逆转的固体状(凝胶),便于制片操作。

⑤保存抗原及脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acidDNA)、核糖核酸(ribonucleic acidRNA),特别是准备用于做免疫组织化学染色和核酸检测的样本,尤其重要。


常用的固定剂

1、单纯固定剂

(1)甲醛:

常用浓度为4%≈10%福尔马林。

优点:渗透力强、对组织收缩较小、能使组织硬化、固定的组织细胞核着色良好;

缺点:封闭抗原决定族、使用不当可形成福尔马林色素。

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秀威 10%中性福尔马林组织固定液

(2)乙醇:

浓度以80%~95%最好。

优点:具有固定、硬化、脱水作用;

缺点:使组织变脆、收缩明显,易出现组织固定不均。


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秀威 无水乙醇


(3)乙酸:

穿透力强,可使组织膨胀,一般不单独使用。


2、混合固定液   

在实际工作中较多使用混合固定液。其固定效果明显优于单一 成分的固定液。

(1)10%中性福尔马林固定液:

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(2)乙醇-甲醛-冰醋酸(AFA)固定液:

甲醛(40%)100ml、95%乙醇850ml、冰醋酸50ml


固定时的注意事项

1、及时固定,冷缺血时间<30min,越早越好。

2、甲醛浸透组织的速度大约2-5mm/24h,固定时间至少6-8h,最好12-48h,超过48小时可造成不良影响,如FISH失败。

3、固定液要充分,一般为组织体积的5-10倍。

4、要防止组织变形。


由于标本固定不当或不充分对后续的诊断或研究造成的不良影响是无法弥补的!所以标本固定是整个组织标本处理过程中的重要环节!


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影响固定质量的因素

1、缓冲液和pH

在弱酸性环境中甲醛固定效果及交联作用会减弱,血色素代谢产物发生化学改变形成棕黑色不溶性双折射晶体色素。色素在pH值<5.7的环境中形成,且当pH在3.0至5.0范围内时色素形成量增多。福尔马林色素很容易被辨认,且一般不影响造血疾病患者继发大量血红蛋白的分解产物的诊断。这种色素在苦味酸酒精溶液中很容易被去除。为了避免福尔马林色素的形成,中性缓冲福尔马林是首选的甲醛基础固定剂。

乙酸和其他酸的作用主要是通过降低pH值破坏蛋白质的三级结构。缓冲液可使溶液维持在最佳pH值上。具体缓冲液的选择取决于固定剂和待分析物的类型。常用的缓冲液有磷酸盐,二甲胂酸盐,碳酸氢盐,重碳酸盐和醋酸。

  • 福尔马林浸透的速度:

  • 2-3 mm左右 / 24 小时(致密组织)


2、固定时间和标本大小

Medawar对固定剂扩散进入组织的因素进行了一些研究(1941)。他发现固定的深度(d)与固定(t)的时间平方根成正比。

公式为:d =k√t。

常数(K)是扩散能力系数,每个固定剂的扩散能力都是特定的。10%的甲中醛该系数为0.79,100%乙醇为1.00,3%重铬酸钾为1.33(Hopwood 1969)。

对于10mm的球体,直到52 或25小时后固定剂才会渗透到球体中心。重要的是要注意每个复合固定剂的各种成分渗透速度不同,因此标本应该越薄越好。  

  • 致密组织福尔马林浸透的速度:

  • 2-3 mm左右 / 24 小时


3、固定的温度

分子的扩散随着温度的升高而增加,因为温度高时分子活动和振动会加快。即甲醛的组织渗透率在较高温度下更快,因此微波炉被应用于甲醛固定中以提高温度和气体分子运动的速度,然而这需要考虑到安全问题(Grizzle & Fredenburgh 2001. 2005)。大多数化学反应在更高的温度中也发生的更迅速,因此甲醛可以更迅速地与蛋白反应(Hopwood 1985)。封闭的组织处理器内固定液的温度可略高于室温,有利于提高固定效果。


4、固定剂的浓度

固定剂的浓度由固定效果和溶解度决定。浓度10%以上的甲醛往往会导致组织硬化和收缩程度的增加(Fox et al 1985),而浓度低于70%的酒精不能使组织有效脱水。


5、固定剂的渗透压和离子组成

缓冲液和固定液的渗透压非常重要;高渗和低渗环境可分别导致组织收缩或膨胀。最好的方案是稍微高渗(400-450 mOsm);然而, 10%NBF的渗透压应约为1500 mOsm。同样,无论渗透效果如何各种离子(Na+, K+, Ca2+, Mg2+)都会影响细胞的形状和结构。因此含这些离子的液体应尽可能是与组织等渗的。


6、固定剂的选择和应用

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7、固定的及时性

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8、组织固定的方式和方法

标本必须切开/剪开/摊开固定。

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固定标本的容器大小要合适、密闭。

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秀威 标本袋系列



远程样本处理

  • 如果手术切除标本距离待检实验室很远,病理医生与技术员应协助外科医生及其他手术室成员确保标本不会因为使用10%中性缓冲福尔马林(NBF)固定而变差。

  • 乳腺癌组织标本在浸入10%NBF固定前应一分为二。

  • 胃癌组织标本在浸入10%NBF固定前应固定在标本板上。

  • 所有标本在运送前均应固定于10%NBF中。

  • 将待检组织浸入10%NBF固定的开始与结束时间均应由操作人记录于标准化组织病理学申请表上。


9、固定液的量要充足

固定液与组织体积比 (至少10:1)。


10、 组织固定的时间要合适

根据实验室情况而定,固定时间一般为8–48 小时


正确记录是保证固定效果的有效措施

  • 记录样本切除至固定的时间很重要;

  • 送检标本应随附完整的组织病理学检测申请表;

  • 外科医生及手术室工作人员的责任:

    记录样本收集日期及时间;

  • 病理医生和技术人员的责任:

    记录固定开始日期及时间;

    同多学科小组有效沟通,以确保相关记录符合操作规程;

  • 申请表应包括:

    标本种类;

    标本位置;

    缝线位置(标记定位用);

    影像检查资料(如有)



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